Enrique de Diego.
Publicamos el abstract de la publicación británica Circulation Research, que en síntesis informa de que el mal está en la proteína SPIKE que todas las vacunas fuerzan al cuerpo a replicarlas. No hay que vacunarse, todas las vacunas son malas. Al final, «sugiere» una conclusión, contradictoria con toda la experimentación, que «reduce la mortalidad asociada a complicaciones cardiovasculares en pacientes con COVID-19″. Pero esta conclusión es de abracadabra porque el mal no está en en el coronavirus sino en la proteína SPIKE. No hay que vacunarse:
La enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19) incluye las complicaciones cardiovasculares además de la enfermedad respiratoria. La infección por SARS-CoV-2 altera la función endotelial e induce inflamación vascular, lo que conduce a la endotelitis. La infección por SARS-CoV-2 se basa en la unión de la glicoproteína Spike (proteína S) a la enzima convertidora de angiotensina 2 (ACE2) en las células huésped. Mostramos aquí que la proteína S sola puede dañar las células endoteliales vasculares (CE) in vitro e in vivo, que se manifiesta por una función mitocondrial deteriorada, una expresión disminuida de ACE2 y actividad de eNOS y un aumento de la glucólisis. El mecanismo subyacente implica la regulación a la baja de la proteína S de AMPK y la regulación al alza de MDM2, lo que provoca la desestabilización de ACE2. Por tanto, el daño endotelial vascular ejercido por la proteína S a través de la regulación a la baja de ACE2 anula la infectividad del virus que queda disminuida.
Los datos clínicos de la enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19) subrayan las complicaciones cardiovasculares además de la enfermedad respiratoria involucrada en esta enfermedad mortal. La infección por SARS-CoV-2 se basa en la unión de la glicoproteína Spike (proteína S) a la enzima convertidora de angiotensina 2 (ACE2) en las células huésped. El endotelio vascular es un tejido clave infectado y dañado por SARS-CoV-2.
1) La infección por SARS-CoV-2 desencadena la producción de ROS mitocondriales y promueve el cambio glucolítico. (de ahí el aumento de LDH)
2) Paradójicamente, ACE2 ejerce un efecto protector sobre el sistema cardiovascular y el SARS-CoV-1 S Se ha demostrado que la proteína S promueve la lesión pulmonar al disminuir el nivel de ACE2 en los pulmones infectados. (en sus vasos sanguíneos)
3) En el estudio actual, mostramos que la proteína S sola puede dañar las células endoteliales vasculares (CE) regulando a la baja la ACE2 y, en consecuencia, inhibiendo la función mitocondrial.
Para examinar si la proteína S causa daño pulmonar en el huésped infectado, administramos un pseudovirus que expresa la proteína S (Pseu-Spike) a los hámsteres por vía intratraqueal. El daño pulmonar fue evidente en los animales que recibieron Pseu-Spike, revelado por el engrosamiento de los tabiques alveolares y una mayor infiltración de células mononucleares (Figura 1A). AMPK fosforila ACE2 Ser-680, MDM2 ubiquitina ACE2 Lys-788 y la diafonía (cruce de expresión) entre AMPK y MDM2 determina el nivel de expresión de ACE2.
4) En los pulmones dañados, los niveles de fosfo-AMPK (pAMPK), fosfo-ACE2 (pACE2) y ACE2 disminuyeron pero los de MDM2 aumentaron (Figura 1Ba). Además, la fosforilación complementaria aumentada y disminuida de eNOS Thr-494 y Ser-1176 indicó una actividad alterada de eNOS. Estos cambios de la expresión de pACE2 / ACE2 y MDM2 y la actividad de AMPK en el endotelio por la proteína S se recapitularon mediante experimentos in vitro utilizando CE de arterias pulmonares cultivadas (PAEC) infectadas con Pseu-Spike que se rescató mediante tratamiento con N-acetil-L-cisteína (NAC), el inhibidor de ROS (Figura 1Bb).
Dado que la homeostasis mitocondrial tiene un efecto profundo en la función de la CE, a continuación estudiamos el impacto de la proteína S en la función mitocondrial. Análisis doble ciego de imágenes confocales de
Las CE tratadas con proteína S1 revelaron un aumento de la fragmentación mitocondrial, lo que indica una dinámica mitocondrial alterada (Figura 1Ca). Para examinar si estos cambios en la morfología mitocondrial se debían, en parte, a la disminución de la cantidad de ACE2, sobreexpresamos ACE2 S680D (ACE2-D, un ACE2 fosfomimético con mayor estabilidad) o S680L (ACE2-L, un defosfomimético con estabilidad disminuida) 4 en CE. Como se muestra en la Figura 1Cb, las CE con sobreexpresión de ACE2-L tenían un mayor número de mitocondrias fragmentadas en comparación con aquellas con ACE2-D. A continuación, realizamos el análisis Seahorse Flux para comparar el efecto de ACE2-D frente a ACE2-L en la función mitocondrial. El análisis de flujo de caballitos de mar mostró que las CE que sobreexpresan ACE2-L habían reducido la respiración mitocondrial basal, la producción de ATP y la respiración máxima en comparación con las CE que sobreexpresan ACE2-D (Figura 1Da). Además, la sobreexpresión de ACE2-L provocó una mayor tasa de acidificación basal, glucólisis inducida por glucosa, capacidad glucolítica máxima y reserva glucolítica (Figura 1Db). Para explorar la base molecular que subyace a la regulación de ACE2 de las alteraciones mitocondriales y glucolíticas, evaluamos los niveles de expresión de genes relacionados con las mitocondrias y la glucólisis en las CE pulmonares aisladas de ratones ACE2-D o ACE2-L knock-in4. Como se muestra en la Figura 1E, los niveles de ARNm de NRF1, HO1 y TFAM (genes relacionados con la biogénesis de las mitocondrias) aumentaron, mientras que los de HK2, PFKFB3 y ENO2 (genes relacionados con la glucólisis) disminuyeron en las CE de pulmón en ratones ACE2-D. , en comparación con los de los ratones ACE2-L.
La infección por SARS-CoV-2 altera la función de la CE e induce inflamación, lo que lleva a la endotelitis.1,5 Debido a que la proteína S disminuyó el nivel de ACE2 y afectó la biodisponibilidad del NO derivado de eNOS, examinamos si la entrada de la proteína S es indispensable para el endotelio disfuncional in vivo. Como se muestra en la Figura 1Fa, la vasodilatación dependiente del endotelio inducida por acetilcolina (ACh) se vio afectada en las arterias pulmonares aisladas de hámsteres a los que se les administró Pseu-Spike, mientras que la vasodilatación independiente del endotelio inducida por nitroprusiato de sodio
(SNP) no se vio afectado por Pseu-Spike. Para confirmar aún más que la vasodilatación dependiente de EC se correlaciona con el nivel de expresión de ACE2, comparamos la vasodilatación inducida por ACh y SNP de los vasos pulmonares de ratones ACE2-D o ACE2-L. Como se anticipó, la vasodilatación inducida por ACh se vio obstaculizada significativamente en las arterias pulmonares aisladas de ratones ACE2-L en comparación con ratones ACE2-D (Figura 1Fb). Sin embargo, no hubo diferencia de vasodilatación inducida por SNP en animales ACE2-D y ACE-L.
Nuestros datos en este documento revelan que la proteína S sola puede dañar el endotelio, que se manifiesta por una función mitocondrial alterada y la actividad de la eNOS pero un aumento de la glucólisis. El deterioro endotelial mediado por la proteína S depende de las modificaciones postraduccionales de ACE2. Parece que la proteína S en las CE aumenta el estrés redox, lo que puede conducir a la desactivación de AMPK, la regulación positiva de MDM2 y, en última instancia, la desestabilización de ACE2.4 Parece paradójico que la reducción de ACE2 por la proteína S disminuya la infectividad del virus, protegiendo así el endotelio. Sin embargo, un sistema renina-angiotensina desregulado debido a la reducción de ACE2 puede exacerbar la disfunción endotelial, dando lugar a endotelitis. En conjunto, nuestros resultados sugieren que el daño de EC ejercido por la proteína S anula la infecciosidad del virus que queda disminuida. Esta conclusión sugiere que el anticuerpo generado por la vacunación y / o el anticuerpo exógeno contra la proteína S no solo protege al huésped de la infectividad del SARS-CoV-2, sino que también inhibe la lesión endotelial impuesta por la proteína S y, en última instancia, reduce la mortalidad asociada a complicaciones cardiovasculares en pacientes con COVID-19.